JOURNAL OF LIGHT INDUSTRY

CN 41-1437/TS  ISSN 2096-1553

食源性致病菌多重PCR检测技术建立及其应用

胡金强 ,  丁慧敏 ,  詹丽娟 ,  赵卫东 ,  侯莹莹 ,  孙新城 ,  高辉 ,  耿尧

downloadPDF
胡金强, 丁慧敏, 詹丽娟, 等. 食源性致病菌多重PCR检测技术建立及其应用[J]. 轻工学报, 2022, 37(1): 12-19. doi: 10.12187/2022.01.002
引用本文: 胡金强, 丁慧敏, 詹丽娟, 等. 食源性致病菌多重PCR检测技术建立及其应用[J]. 轻工学报, 2022, 37(1): 12-19. doi: 10.12187/2022.01.002
shu
HU Jinqiang, DING Huimin, ZHAN Lijuan, et al. Development and application of multiplex PCR detection techniques for foodborne pathogenic bacteria[J]. Journal of Light Industry, 2022, 37(1): 12-19. doi: 10.12187/2022.01.002
Citation: HU Jinqiang, DING Huimin, ZHAN Lijuan, et al. Development and application of multiplex PCR detection techniques for foodborne pathogenic bacteria[J]. Journal of Light Industry, 2022, 37(1): 12-19. doi: 10.12187/2022.01.002
shu

食源性致病菌多重PCR检测技术建立及其应用

  • 1. 郑州轻工业大学 食品与生物工程学院, 河南 郑州 450001;

  • 2. 河南省食品安全国际联合实验室, 河南 郑州 450001;

  • 3. 食品生产与安全河南省协同创新中心, 河南 郑州 450001;

  • 4. 河南农业大学 食品科学技术学院, 河南 郑州 450002

    • 作者简介: 胡金强(1979-),男,河南省信阳市人,郑州轻工业大学副教授,博士,主要研究方向为食品安全。E-mail:jqhu@zzuli.edu.cn;

  • 基金项目: 国家自然科学基金项目（31201901）；河南省自然科学基金项目（182300410096）；河南省科技攻关项目（18210231069，182102110393）；星空众创空间创新培育孵化项目（2020ZCKJ103）

  • 中图分类号: TS201.6;TS207.4

Development and application of multiplex PCR detection techniques for foodborne pathogenic bacteria

  • 1. College of Food and Bioengineering, Zhengzhou University of Light Industry, Zhengzhou 450001, China;

  • 2. International Joint Laboratory of Food Safety of He'nan Province, Zhengzhou 450001, China;

  • 3. Collaborative Innovation Center of Food Production and Safety of He'nan Province, Zhengzhou 450001, China;

  • 4. College of Food Science and Technology, He'nan Agricultural University, Zhengzhou 450002, China

  • Received Date: 2021-05-07

    CLC number: TS201.6;TS207.4

  • 摘要: 针对6种食源性致病菌特异性基因（金黄色葡萄球菌nuc基因、副溶血性弧菌tdh基因、单核细胞增生李斯特菌hly基因、阪崎克罗诺杆菌ompA基因、鼠伤寒沙门氏菌invA基因和大肠杆菌O157：H7 rfbE基因）建立了多重PCR检测技术，分析了其特异性和敏感性，并评估了其在人工染菌牛奶中的应用可行性。结果表明：该检测技术可扩增预期的345 bp、307 bp、269 bp、237 bp、188 bp和142 bp细菌特异性PCR产物，无非特异性扩增，且不与非靶细菌产生交叉反应；对细菌纯培养物基因组DNA的检测限为10 pg，对人工染菌牛奶样品中致病菌的检测限为103 CFU/mL，可实现6种食源性致病菌特异性强、灵敏度高、简便高效的同时检测。
    Abstract: Multiple PCR detection techniques were established for 6 foodborne pathogenic bacteria specific genes (the nuc gene of Staphylococcus aureus, tdh gene of Vibrio parahaemolyticus, hly gene of Listeria monocytogenes, ompA gene of Cronobacter sakazakii, invA gene of Salmonella typhimurium, and rfbE gene of Escherichia coli O157:H7). The sensitivity and specificity of multiplex PCR were analyzed, and its application feasibility in artificially-contaminated milk was also evaluated. The results showed that the specific PCR products of 345 bp, 307 bp, 269 bp, 237 bp, 188 bp and 142 bp were amplified as expected in multiplex PCR without nonspecific amplification and cross reactivity with non-target pathogenic bacteria. Multiplex PCR developed in this study could detect as little as 10 pg of genomic DNA of pure bacterial culture and 103 CFU/mL of milk artificially-contaminated with pathogenic bacteria, which could specifically, sensitively, rapidly and efficiently detect six foodborne pathogenic bacteria simultaneously.
    1. [1]

      胡金强, 黄润娜, 王一, 等.核酸适配体在食源性致病菌检测中应用的研究进展[J].食品工业科技, 2019, 40(9):315-322.

    2. [2]

      YU C P, CHOU Y C, WU D C, et al.Surveillance of foodborne diseases in Taiwan:A retrospective study[J].Medicine, 2021, 100(5):e24424.

    3. [3]

      董炜, 李军.奶牛乳房炎源金黄色葡萄球菌血清型鉴定、毒力基因及耐药性检测与分析[J/OL].中国动物传染病学报, 2021[2021-04-27].http://kns.cnki.net/kcms/detail/31.
      2031.S.20210427.1024.012.html.

    4. [4]

      YANG Q, GUO W, LIU Y, et al.Novel single primer isothermal amplification method for the visual detection of Vibrio parahaemolyticus[J].Food Analytical Methods, 2021, 14:1995-2002.

    5. [5]

      RASCHLE S, STEPHAN R, STEVENS M J A, et al.Environmental dissemination of pathogenic Listeria monocytogenes in flowing surface waters in Switzerland[J].Scientific Reports, 2021, 11(1):9066.

    6. [6]

      殷秋妙, 赵亚荣, 王威利, 等.奶粉中沙门氏菌和阪崎肠杆菌的测定能力验证结果分析[J].食品安全质量检测学报, 2020, 11(24):9336-9342.

    7. [7]

      ANGELOPOULOU M, TZIALLA K, VOULGARI A, et al.Rapid detection of Salmonella typhimurium in drinking water by a white light reflectance spectroscopy immunosensor[J].Sensors, 2021, 21(8):2683.

    8. [8]

      王琪, 徐文娟, 石盼盼.IMSA技术快速检测肠出血大肠杆菌O157:H7方法的建立及应用[J].食品工业科技, 2021, 42(17):263-269.

    9. [9]

      吴怡, 刘露露, 吴永民, 等.高通量测序检测米线中的食源性致病菌[J/OL].食品科学, 2021[2021-04-13].http://kns.cnki.net/kcms/detail/11.
      2206.TS.20210413.1503.008.html.

    10. [10]

      XUAN M N T, KAEWLAMUN W, SAIWICHAI T, et al.Development and application of a novel multiplex PCR assay for the differentiation of four haemosporidian parasites in the chicken Gallus gallus domesticus[J].Veterinary Parasitology, 2021, 293(1):109431.

    11. [11]

      CHO S, ALLISON J C, PARK K, et al.A clinical case of scrub typhus in the united states forces korea patient with eschar and genetic identification of orientia tsutsugamushi using multiplex PCR-based next-generation sequencing[J].Pathogens, 2021, 10(4):424.

    12. [12]

      LIM K H, KIM S H, YANG S, et al.Advances in multiplex PCR for Alzheimer's disease diagnostics targeting CDK genes[J].Neuroscience Letters, 2021, 749:135715.

    13. [13]

      RIHNE T, NAMITA, SINGH K P, et al.Improvement in molecular detection of phytoplasma associated with rose by selection of suitable primers and development of a multiplex PCR assay[J].3 Biotech, 2021, 11(4):1-17.

    14. [14]

      ZHANG Y, HU X Z, WANG Q J.Sensitive and specific detection of E.coli, Listeria monocytogenes, and Salmonella enterica serovar Typhimurium in milk by microchip electrophoresis combined with multiplex PCR amplification[J].Microchemical Journal, 2020, 157:104876.

    15. [15]

      LI P, ZHANG D X, LI H M, et al.Establishment and application of multiplex PCR for simultaneously detecting Escherichia coli, Salmonella, Klebsiella pneumoniae, and Staphylococcus aureus in Minks[J].Frontiers in Veterinary Science, 2020, 7:588173.

    16. [16]

      CHEN Y, WANG Z X, SHI Q Z, et al.Multiplex PCR method for simultaneous detection of five pathogenic bacteria closely related to foodborne diseases[J].3 Biotech, 2021, 11(5):219.

    17. [17]

      中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会.食品安全国家标准食品微生物学检验副溶血性弧菌检验:GB 4789.7-2013[S].北京:中国标准出版社, 2013.

    18. [18]

      中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会, 国家食品药品监督管理总局.食品安全国家标准食品微生物学检验:GB 4789-2016[S].北京:中国标准出版社, 2016.

    19. [19]

      CHEN J Q, HEALEY S, REGAN P, et al.PCR-based methodologies for detection and characterization of Listeria monocytogenes and Listeria ivanovii, in foods and environmental sources[J].Food Science & Human Wellness, 2017, 6(2):39-59.

    20. [20]

      冯可, 胡文忠, 姜爱丽, 等.多重PCR法检测鲜切哈密瓜中3种食源性致病菌[J].食品科学, 2017, 38(6):295-302.

    21. [21]

      XU Y G, SUN L M, WANG Y S, et al.Simultaneous detection of Vibrio cholerae, Vibrio alginolyticus, Vibrio parahaemolyticus and Vibrio vulnificus in seafood using dual priming oligonucleotide (DPO) system-based multiplex PCR assay[J].Food Control, 2017, 71:64-70.

    22. [22]

      钟丽琪, 郭亚辉, 曹进, 等.食源性致病菌检测技术的研究概述[J].食品安全质量检测学报, 2020, 11(13):4387-4393.

    23. [23]

      刘骆强, 姚艳玲, 管佳丽.5种食源性致病菌PCR检测方法的建立[J].食品安全质量检测学报, 2019, 10(5):1330-1335.

    24. [24]

      童桂香, 黎小正, 韦信贤, 等.水产品中4种食源性致病菌多重PCR检测方法的建立[J].南方农业学报, 2015, 46(12):2217-2222.

    25. [25]

      李洋洋.三重PCR快速检测婴幼儿奶粉中的病原菌[D].保定:河北农业大学, 2012.

    26. [26]

      杨梦婕, 任佳, 李洋, 等.GeXP多重聚合酶链式反应法检测5种常见食源性致病菌[J].中国食品卫生杂志, 2020, 32(4):386-390.

    27. [27]

      SUO Y J, GAO S G, XIE Y P, et al.A multipathogen selective enrichment broth for simultaneous growth of Salmonella enteria, Escherichia coli O157:H7, and Shigella flexneri[J].Journal of Food Safety, 2018, 38(1):e12388.

    28. [28]

      董妍, 胡文忠, 何煜波, 等.食源性致病菌分子生物学检测中菌体分离富集与DNA提取技术研究进展[J].食品工业科技, 2015, 36(23):371-375.

    1. [1]

      李艳坤 , 张伟 , 刘彦伶 . 数据融合策略在食用油真实性鉴别中的研究与应用进展. 轻工学报, 2024, 39(5): 50-59. doi: 10.12187/2024.05.006

    2. [2]

      吴晓东 , 刘畅 , 李俊 , 胡良志 , 贺凌晨 , 袁海霞 , 李强 , 黄锦标 . 基于高光谱检测的烟丝加香均匀性表征方法. 轻工学报, 2024, 39(5): 95-101. doi: 10.12187/2024.05.011

    3. [3]

      卢晓波 , 徐海 , 朱俊召 , 张宇 , 谭健 , 高冠男 , 胡军华 , 林龙 . 基于机器视觉的加热卷烟烟支端部质量检测系统设计. 轻工学报, 2024, 0(0): -.

  • 加载中
WeChat 点击查看大图
计量
  • PDF下载量:  59
  • 文章访问数:  4311
  • 引证文献数: 0
文章相关
  • 收稿日期:  2021-05-07
通讯作者: 陈斌, bchen63@163.com
  • 1. 

    沈阳化工大学材料科学与工程学院 沈阳 110142

  1. 本站搜索
  2. 百度学术搜索
  3. 万方数据库搜索
  4. CNKI搜索
胡金强, 丁慧敏, 詹丽娟, 等. 食源性致病菌多重PCR检测技术建立及其应用[J]. 轻工学报, 2022, 37(1): 12-19. doi: 10.12187/2022.01.002
引用本文: 胡金强, 丁慧敏, 詹丽娟, 等. 食源性致病菌多重PCR检测技术建立及其应用[J]. 轻工学报, 2022, 37(1): 12-19. doi: 10.12187/2022.01.002
shu
HU Jinqiang, DING Huimin, ZHAN Lijuan, et al. Development and application of multiplex PCR detection techniques for foodborne pathogenic bacteria[J]. Journal of Light Industry, 2022, 37(1): 12-19. doi: 10.12187/2022.01.002
Citation: HU Jinqiang, DING Huimin, ZHAN Lijuan, et al. Development and application of multiplex PCR detection techniques for foodborne pathogenic bacteria[J]. Journal of Light Industry, 2022, 37(1): 12-19. doi: 10.12187/2022.01.002
shu

食源性致病菌多重PCR检测技术建立及其应用

    作者简介:胡金强(1979-),男,河南省信阳市人,郑州轻工业大学副教授,博士,主要研究方向为食品安全。E-mail:jqhu@zzuli.edu.cn
  • 1. 郑州轻工业大学 食品与生物工程学院, 河南 郑州 450001;
  • 2. 河南省食品安全国际联合实验室, 河南 郑州 450001;
  • 3. 食品生产与安全河南省协同创新中心, 河南 郑州 450001;
  • 4. 河南农业大学 食品科学技术学院, 河南 郑州 450002
  • 收稿日期: 2021-05-07
基金项目:  国家自然科学基金项目（31201901）；河南省自然科学基金项目（182300410096）；河南省科技攻关项目（18210231069，182102110393）；星空众创空间创新培育孵化项目（2020ZCKJ103）

摘要: 针对6种食源性致病菌特异性基因（金黄色葡萄球菌nuc基因、副溶血性弧菌tdh基因、单核细胞增生李斯特菌hly基因、阪崎克罗诺杆菌ompA基因、鼠伤寒沙门氏菌invA基因和大肠杆菌O157：H7 rfbE基因）建立了多重PCR检测技术，分析了其特异性和敏感性，并评估了其在人工染菌牛奶中的应用可行性。结果表明：该检测技术可扩增预期的345 bp、307 bp、269 bp、237 bp、188 bp和142 bp细菌特异性PCR产物，无非特异性扩增，且不与非靶细菌产生交叉反应；对细菌纯培养物基因组DNA的检测限为10 pg，对人工染菌牛奶样品中致病菌的检测限为103 CFU/mL，可实现6种食源性致病菌特异性强、灵敏度高、简便高效的同时检测。

English Abstract

参考文献 (28) 相关文章 (3)

目录

/

返回文章

网站版权 © 轻工学报编辑部

地址：河南省郑州市科学大道136号邮编：450001

本系统由北京仁和汇智信息技术有限公司开发 技术支持： info@rhhz.net