针对传统烟草花叶病毒(TMV)检测方法耗时较长、应用受限的问题,基于双抗夹心法研发快速定性检测TMV的胶体金检测试纸条,并对其制备条件进行优化,考查其检测限、准确性和特异性。结果表明:该试纸条的适宜制备条件为缓冲液添加量4 μL、抗体质量浓度10 μg/mL、NC膜选择CN140型、样本提取液0.02 mol/L PBS;该试纸条对TMV-CP蛋白的检测限为0.1 μg/mL,与烟草丛顶病毒、番茄斑萎病毒、马铃薯Y病毒无交叉反应,特异性良好;将其进行实际样品检测,与PCR的总符合率为95.0%,阳性符合率为93.3%,准确性良好。此试纸条在10 min内即可显示检测结果,且操作简单,可用于烟田TMV的快速检测。